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制备动物组织的DNA的具体步骤

时间:2024-10-21 13:21:17

1、首先,切取组织5g左右,剔除结蹄组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵,倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。

制备动物组织的DNA的具体步骤

2、然后,加入1ml的10%SDS,混匀,5000r/min离心数秒钟,取上清液于新离心管中,用等体积的酚/氯仿/异戊醇抽提,待分层后,在3000r/min离心五分钟。

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3、然后,去上层水相至干净离心管中,加入两倍体积的乙醚抽提,移去上层乙醚,保留下层水相。

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4、然后,加入1/10体积的3mol/lNaAc,及两倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA,室温下静置10-20mn,DNA沉淀形成白色絮状物。

制备动物组织的DNA的具体步骤

5、然后,用玻璃棒钩出DNA沉淀,在70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1mlTE中,在-20摄氏度下保存。

制备动物组织的DNA的具体步骤

6、最后,如果DNA溶液中有不溶颗粒,可在5000r/min短暂离心,取上清液,如要除去其中的RNA,可加入5微升的10mg/mlRNaseA,在37摄氏度保温半小时,用酚/氯仿/异戊醇抽提后,按照第四步重沉淀DNA。

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