1、第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。充分破碎匀浆（非常重要，否则严重降低产量）a. 电动破碎匀浆（首选强烈推荐，产量最高结果最稳定）：取约10-20mg（<30mg）新鲜组织，加入300μl裂解液RLT后用电动刀片匀浆机（Rotor-Stator如TissueRupter）或者电动玻珠研磨机（Bead Mill如TissueLyser）按照机器使用说明彻底破碎匀浆组织细胞。b. 液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉10-20mg（<30mg）转入装有300μl裂解液RLT的1.5ml离心管中, 用手剧烈振荡20秒，充分裂解。用带钝针头的一次性 1 ml(配0.9mm针头) 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒) ，可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。讲匀浆转入新离心管。c. 研钵研磨匀浆： 取适量组织细粉10-20mg（<30mg）放入小研钵后，迅速加入300μl裂解液RLT后直接室温充分研磨匀浆。将匀浆转入新离心管。注意：如果匀浆沾在研钵内损失比较大，可以按照比例适当提高起始组织用量和裂解液RLT用量。此外，也可以先用液氮研磨组织成细粉，然后液氮刚刚蒸发完的时候加入裂解液RLT充分研磨匀浆，可以提高研磨效果。
2、吸取590μl RNase-free H2O至匀浆中。加入10μl蛋白酶K，移液器吹打混匀。
3、55℃下水浴10分钟。
4、室温下以13，000rpm离心5分钟。这样将会形成小量的组织碎片沉淀，而且在上清的顶部可能看见少量的漂浮物。
5、转移上清至一个新的1.5ml离心管中。注意：转移时不要带入沉淀物，而且移液枪头必须放在上清漂浮物之下。漂浮物通常可能会黏附在枪头的外壁，注意不能将其带入离心管中。
6、较精确估计裂解物(上清)体积，加入0.5体积的无水乙醇（一般为450μl），此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
7、立刻将混合物(每次小于700μl，可以分两次加入)加入同一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心60秒，弃掉废液。
8、加700μl 去蛋白液RW1，室温放置30秒，12，000rpm 离心30秒，弃掉废液。如果DNA残留明显,可在加入RW1后室温放置5分钟再离心。
9、加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液RW，,重复一遍。
10、将吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11、取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water（事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量）， 室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。
12、可选：使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度可以适当提高一些。如果预期RNA产量>30μg，可加30-50μl RNase free water重复步骤11，合并两次洗脱液，可以提高产量15–30%，但浓度会有所降低。
13、关于DNA 的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,EASYspin系列RNA提取产品，由于采取了独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留（一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。。在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I处理。
14、RNA 纯度及浓度检测：完整性： RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9 之间，但这并不表示RNA 不纯。浓度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。