1、用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA和目的基因；2)按连接步骤连接目的基因和载体，并转化到转化DH5α感受态细胞中；3)分别挑取单菌落接种于5mLLB(0.1g·L-1氨苄柿燮镂称青霉素)中，37℃培养过夜；4)以2%体积比转接于2mlLB(0.1g·L-1氨苄青霉素)中，37℃继续培养2.5hr，至细菌对数生长期，加0.1mmol/LIPTG2µl诱导3-4hr，同时设立不加IPTG诱导作为对照；5)取上述菌液1mL，12000rpm离心10min，收菌沉淀；6)重悬于冰的100µlPBS中，加入PMSF至终浓度为10mmol/L。震荡器震荡混匀，加入2×加样缓冲液，煮沸10min变性，12,000rpm离心10min；7)分别取诱导前和诱导后的样品10µl进行SDS-PAGE电泳分析。（PS：如果表达载体的原核启动子为PL启动子，则在30-32℃培养数小时，使培养液的OD600达0.4-0.6，迅速使温度升至42℃继续培养3-5h；如果表达载体的原核启动子为tac等，则37℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG至终浓度为1mmol/L，继续培养3-5h）