1、1．取材
2、敲脑法处死鱼，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。
3、切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或1mm×1mm×2mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块2－3mm厚。
4、 2．固定
5、将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入波因氏固定液中固定，固定24h。
6、3.洗涤
7、材料经固定后,流水冲洗6小时或过夜。
8、4.脱水
9、材料依次经75%、75%、85%、95%、95%、100%、100%各级乙醇溶液脱水，各2-3h。第二次75%乙醇溶液脱水后可长期保存，85%乙醇溶液脱水后可过夜保存，第二次95%乙醇溶液脱水后可加入少量伊红粉染色以便于修整蜡块。
10、 5．透明
11、纯酒精、二甲苯等量混合液2-3h，二甲苯Ⅰ2h、Ⅱ2h（至透明为止）。
12、由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度的透明状态。
13、 6．透蜡
14、放入2/3二甲苯和1/3石蜡混合液，1/2二甲苯和1/2石蜡的混合液，再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ透蜡各50-60分钟。此时可过夜保存。
15、透蜡的目的是除去组织中的透明剂（如二甲苯等），使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便包埋。透蜡时间根据组织大小而定。透蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在55-60℃左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。一般置于恒温箱1h。用于包埋的石蜡的熔点在50~60℃之间，包埋时应根据组织材料、切片厚度、气候条件等因素，选择不同熔点的石蜡。一般动物材料常用的石蜡熔点为52~56℃，植物材料用的石蜡熔点为54~58℃。
16、 7.包埋
18、包埋时，用镊子夹取石蜡模子（金属质地）在酒精灯上稍加热，放在平的桌面上，从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入少许石蜡。再将镊子在酒精灯上稍加热，夹取材料将组织块放入蜡模中，排列整齐。再放上包埋盒，轻轻倒入熔蜡。注意保持组织块的整齐排列,包埋动作要迅速，否则熔蜡凝固。轻轻将纸盒两侧的把手提起，慢慢地平放在面盆，并立即使它沉入水中，使盒中包埋块迅速凝固。待石蜡完全凝固（约30min）后即可取出备用。
19、
20、 8.切片
22、 ①将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。
23、 ②将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。
24、 ③摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。
25、 ④调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15度左右。
26、 ⑤调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般为6-10微米。
27、 ⑥一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以40-50r/min。
28、 ⑦切成的蜡带到20-30cm长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。
29、 ⑧用单面刀片切取蜡片一小段，放在载玻上加水一滴，置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。
30、⑨切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿或二甲苯擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭干净妥为保存。
31、 9.展片、贴片、烤片
34、 打开水浴锅，使水温维持在40-45℃，另准备30%乙醇溶液。
35、 ①切片时，将一碗30%乙醇溶液放于切片机旁的桌面上。
36、 ②用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带，放在乙醇溶液的水面上，使切片展开。
37、 ③小镊子轻轻地将连在一起的切片分开，用一个载玻片将已展开的切片捞至温水中，使之充分展开。
38、 ④另取洁净的载玻片，捞起展开的切片，使其位于切片中央，另一端（磨边，粗糙的一端）磨面上标记或贴上标签，放于切片架上。
39、 ⑤60℃烤箱烤片2h至蜡熔化。此时可过夜保存。
40、 10.脱蜡复水
41、石蜡切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各15min，然后放入1/2二甲苯和1/2无水乙醇的混合液，1/2二甲苯和1/2无水乙醇的混合液各3min,再放入100%、100%、95%、90%、85%、75%、50%各级酒精溶液中各3-5min，再放入蒸馏水中3min。
42、 11．染色
43、切片放入苏木精中染色约10-30min。注意埃利希苏木精染液的成分：苏木精1g，纯酒精50ml，冰醋酸5ml，甘油50ml，钾矾（硫酸铝钾）约5g（饱和量），蒸馏水50ml。
44、染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入恒温箱中染色。用显微镜观察染色是否合适，否则重新脱蜡复水再染色。
45、 12．水洗
46、用自来水流水冲洗约1-2min。使切片颜色变蓝（或放入碱性水中也可），但要注意流水不能过大，以防切片脱落。
47、 13．分化
48、将切片放入0.5%盐酸乙醇液中褪色，约2秒至数十秒钟。见切片变红，颜色较浅即可。这一步骤是H.E.染色成败的关键，，如分化不当会导致染色不匀，或深或浅，得到的切片染色效果差。如果染色适中，可取消此步骤。注意1%盐酸乙醇液的成分：盐酸1份和50%酒精100份。
49、 14．漂洗
50、切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。
51、 15．脱水Ⅰ
52、切片入50%乙醇→75%乙醇→85%乙醇中各2min。
53、 16、复染
54、用1%伊红乙醇液对比染色1-3min。注意1%伊红酒精溶液的成分：伊红1g溶于100ml95%酒精溶液。
55、伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
56、 17．脱水Ⅱ
57、将切片放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3-5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。
58、 18．透明
59、切片放入1/2二甲苯和1/2无水乙醇的混合液、二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3-5min。此时可过夜保存。
60、二甲苯应尽量保持无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
61、 19．封藏：中性树胶封存
63、因切片经二甲苯透明，使用中性树胶作为封藏剂，树胶可用二甲苯稀释至合适的稠度。
64、封藏的方法：
65、封片前应根据材料的大小，选用不同规格的盖玻片。材料透明后，在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从二甲苯中取出放在纸上（切片的一面向上），迅速地在切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧，稍为倾斜使其左侧与封藏剂接角，然后再缓慢地将盖玻片放下，这样就可以减少或避免产生气泡。如胶液不足，可以用玻棒再滴一滴树胶从盖玻片边缘补足。如胶液过多，可在干燥以后用刀刮去，并用纱布蘸二甲苯拭去残留的树胶。
