样品殿秩痊肭层在浓缩胶中能得到浓缩是因为:浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。
当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。
浓缩叫的配置方式
一般同工酶可选择7.5%~10%的胶(过氧化物酶和酯酶7.5%较合适,超氧化物歧化酶用10%,可溶性蛋白可根据需要配制)。将配制好的凝胶液置真空干燥器中,抽气10Min,再加入TEMED15μl;混匀后用一细玻棒引流,沿无凹槽的玻板缓缓注入胶室中,注胶过程要防止气泡产生。
胶液加到离凹槽3CM处为止,立即用注射器轻轻在胶溶液上面铺1CM高的水层,但不要扰乱丙烯酰胺胶面。待分离胶和水层之间出现清晰的界面时,表示聚合已完成。
用注射器小心吸出上层覆盖水,按表5-1配制好浓缩胶,抽气后加入5μlTEMED,混合后加到分离胶上层,插入预先选择好的样品梳,注意不要带入气泡。