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杂交与杂交后清洗的步骤

时间:2024-10-11 22:10:06

1、首先,进行预杂交操作,将HIV基因芯片漫人预杂交液,42"C中温育45min。

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2、然后,用去离子水进行清洗,取出芯片,用MilliQ水室温下洗5 次;在异丙醇中浸一下,再空气中进行自然干燥。

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3、然后,标记样品的将两种荧光标记的样品分别与等体积、42"C预热的2X冠魂能爝杂交液混合,使荧光标记的DNA准备样品浓度均为2mg/L,95"C变性5min,以最大转速离心2min。

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4、然后,进行杂交后清洗,将上述杂交样品加到预杂交处理过的芯片上,小心地盖上盖玻片,以防产生气泡。

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5、然后,进行分子杂交,放人杂交盒,并在其两端的小孔中各加人10pl水保持湿度,42C水浴杂交16~20h,打开杂交盒,轻轻取出芯片,不要移动盖玻片。

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6、最后,将芯片迅速漫人洗脱液1中,在42"C下,轻轻摇晃4min,将芯片转移至洗脱液2中,室温下轻朕炔损腱轻摇晃4min,3 将芯片转移至洗脱液中,洗脱l1min,重复4次,用蒸馏水冲洗玻片,<10s,用无水乙醇清洗,在空气中干燥。

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