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不同浓度的氨基酸结构类似物对菌株生长抑制作用

时间:2024-10-14 14:43:07

1、首先,氨其酸结构类似物对出发菌株生长的抑制及其恢复作用,生长抑制及其恢复作用的初步确定,挑取出发菌株Asl.542在斜面上培养24 h细胞,一环接人3 ml 无菌生理盐水中,离心洗涨2次,制成菌悬液。再以无菌移液管吸取菌悬液0.1ml均匀地择在基本培养基平皿上。

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2、然后,取少许固体的AEC 加在平皿不同区域的中心。因为苏氨酸对AEC的抑菌可以起增效作用,所以在AFC 处同时再加上少量的苏教酸,30C培养24 h 后在加上述药物的位点周围有明显的抑菌圈出现,说明AEC 对菌株AS1.542的生长有明显的抑制作用。在AEC的抑菌圈内分别加上少量固体的L-赖氨酸,再继续培养24~ 28h.发现在加有氨基酸位点周围重新出现明显的生长现象,说明它对AEC 对菌的生长抑制有恢复作用。

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3、然后,不同浓度的氨基酸结构类似物对出发菌株生长的抑制作用,采用液体培养法进一步碍测行臬试验测定不同浓度的AEC 对出发菌株Asl.5 42 生长的抑制及其恢复作用。在含2 ml液体断芡闽彝基本培养基的试管中,分别加入AEC 'Thr为0.25/0.25、0.5/0.5、1.0/1.0.2.0 ,2.0 及3.0/3.0 mg/ml,同时以不加结构类似物的试管培养物作为对照,各管接种洗净Asl.542 菌悬液0.1ml 作为A组试验。

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4、然后,B组试验除培养液中加人上述不同浓度的AEC 'Thr 外,还在含有AEC 的各管内分别添加1mg/ml 的L -赖氨酸,同样接菌悬液0.1ml,A.B两组同时置30C摇床上培养20h后,用721型分光光度计(波长620 nm)测定各管菌悬液的吸光度,计算出各试管中菌体的相对生长率,以确定AEC 对出发菌株AS1.542 生长抑制的浓度及L-赖氨酸对生长抑制的恢复作用。

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5、然后,进行诱变处理,钝齿棒杆菌Asl.542 对L-赖氨酸的结构类似物AEC的抑制生长有显著的敏感性,而这种抑制作用可被L-赖氨酸恢复,可以确定AS1.542菌体为出发菌株,经人工诱变筛选产L.-赖氨酸的抗反馈调节突变株,选育这类突变株的诱变处理方法与筛选营养缺陷型相同。

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6、最后,抗AEC突变株的检出,把经N哌囿亡噱TG处理过的AS1.542 菌悬液离心除去上清液,用生理盐水把菌体离心洗涤3次后,将洗净的菌体悬浮在3ml 生理盐水中,混勻以10 1.10 ~及10-3 3个不同稀释度进行稀释,制备成包括原菌悬液在内的4 个含细胞数目不同的菌悬液。然后用无菌移液管从4个不同样品中各取0.1ml 分别均匀涂布在含AEC/Thr 为1,1、2/2和3/3mg/ml的基本培养平皿上,并涂布接种在不含结构类似物的同样平板上作为对照,培养5~7d.若在含不同剂量AEC/Thr的平皿上生长。

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