将已接种细菌的培养基置于二氧化碳环境中进行培养。
1、二氧化碳孵箱
1、能自动调节二氧化碳的含量和温度，使用较为方便。
2、烛缸法
1、取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨口处涂以凡士林。
2、将接种细菌的培养基放入缸中，点燃蜡烛，加盖密封。
3、随燃烧产生的CO2增加，蜡烛自行熄灭，此时缸内CO2浓度约为5%~10%。置37℃孵箱孵育。
3、化学法（重碳酸钠-盐酸法）
1、按每升容积重碳酸钠0.4g与1mol/L盐酸0.35ml比例，分别取两试剂置于容器内。
2、放置于标本缸或干燥器内，密封后倾斜容器。
3、使盐酸与重碳酸钠接触产生CO2。