1、层析介质准备：Phenyl-SepharoseTM6 Fast Flow疏水层析介质保存在20%乙醇中，取出层析介质后，倾出乙醇溶液。加入溶液A，溶液的体积约占总体积的1/4。
2、 装柱：将层析柱洗净，固定在铁架台上，层析柱下口用螺旋夹夹紧。加入疗义化匾溶液B，打开下口让溶液流出，排出残留气泡，柱中保留高度约2厘米的溶液。将准备唁赋獭狍好的层析介质轻轻搅匀，用玻璃棒引流，沿层析柱内壁将层析介质缓慢加进柱中。等到层析介质在柱中沉积高度超过1厘米时，打开下口。柱床高度达到6-8厘米时关闭下口，装柱尽可能一次装完，避免出现界面。
3、柱平衡：用溶液B平衡1-2个床体积。注意始终保持层析介质处于溶液中，不要干柱。
4、上样：取样品加入平衡好的层析柱，并收集层析柱下口流出组分，调节流速为1ml/min,每管3ml。
5、 洗涤：用溶液B洗涤1个床体积，洗去上样不吸附组分。收集层析柱下口流出成分。
6、洗脱与收集：梯度混合器左面装入250ml溶液A，右面装入250ml溶液B。按照100%-0%1.7M (NH4)2SO4梯度洗脱500ml，收集洗脱液。
7、 检测：取各收集管样品，280nm处测定紫外吸收。
8、 疏水层析介质清洗与保存：层析介质先用水清洗，然后用0.5MNaOH洗脱，最后用水洗至中性。处理好的层析介质放在20%乙醇中，4℃保存。
9、以各个收集管的管号为横坐标，280nm处紫外吸收值为纵坐标作图，得到洗脱曲线。分析实验结果并讨论。