1、包被:取蛋白20ul 多肽5ul 放入1ml包被液中用旋涡混合器混匀，取150ul加入聚乙烯板中，37摄氏度包被2小时。包被好后，用pbst清洗三次，每次五分钟。
2、封闭：加封闭剂150ul，37摄氏度封闭一小时。封闭好后，用pbst清洗三次，每次五分钟。
3、一抗：取4ul的抗体加入1ml的封闭剂中充分混匀，加150ul到聚乙烯板中，37摄氏度一小时。用pbst清洗三次，每次五分钟。
4、二抗：加兔抗加入封闭剂中（1：8000）混匀，加150ul到聚乙烯板中，37摄氏度一小时。用pbst清洗三次，每次五分钟。
5、显色：显色液A与显色液B（1：1）混合，放在暗处，取125ul，放入暗处10分钟。
6、终止：加2m的硫酸
7、结果：用酶标仪测定