1、取材,固定:固定液——甲醛(福尔马林)从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0.5厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。
2、修剪,脱水,透明:脱水剂——酒缔眠箨盘精 透明剂——二甲苯不同组织固定时间不同,固定成功后需要修剪25px*25px*5px,放入包埋盒中,流水冲洗(去除组织中的固定液)30分钟。至于不同浓度的酒精脱水,一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋。
3、浸蜡,包埋:石蜡将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋,冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片。
4、切片、展片、烤片:将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45℃恒温箱中烘干。
5、脱蜡、至水、染色:脱蜡剂:二甲苯 至水剂:酒精 染色剂:苏木精水溶液,酒精伊红染