1、五日培养法 对于较清洁的水样，即BOD5小于7mg/L，则不必进行稀释，可直接测定：取其分为两份，一份测其当时的溶解氧；另一份在（20±1）℃下培养5d，再测溶解氧，两者之差即为BOD5。 对于大多数污水，为保证水体生物化学过程所必需的条件，测定时须按估计的污染程度适当的加特制水稀释，然后取稀释后的水样进行测定，同时测定特制水在培养前后的溶解氧。
2、（1）稀释水 对于污染的地面水和大多数工业废水，因含有较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以保证在培养过程中有充足的溶解氧。稀释水一般用蒸馏水配置。 水样的稀释倍数应该根据水样的性质来考虑，一般应使稀释水样在培养后剩余溶解氧大于1mg/L，培养期间所消耗的溶解氧大于2mg/L。
3、（2）接种稀释水 对于不含或少含微生物的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水或经过氯化处理的废水，在侧定BOD5时应接种能降解废水中有机物的微生物。当废水中存在着难被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或剧毒物质时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。接种有微生物或驯化微生物的稀释水称为接种稀释水，由选取适量接种液加于稀释水中混匀获得。一般每升稀释水中接种液加入量为：生活污水1-10mL；或表层土壤浸出液20-30mg/L；或河水、湖水10-100mL。接种稀释水pH应为7.2，BOD5值在0.3-1.0mg/L之间为宜，且在配置后应立即使用。
4、接种液的来源一般有： ① 城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上层清夜供用。 ② 表层土壤浸出液，取100g花园土壤或植物生长土壤，加入1L水，混合并静置10m足毂忍珩in，取上清溶液供用。 ③ 用含城市污水的河水或湖水。 ④ 污水处理厂的出水。 ⑤ 当分析含有难于降解物质的废水时，在排污口下游3-8km处取水样作为废水的训化接种液。如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用做接种液。一般驯化过程需要3-8d。
5、（3）适用范围 五日培养法适用用于BOD5大于或等于2mg/L，最大不超过6000mg/L的水样。当水样BOD5大于6000mg/L，会因稀释带来一定的误差。 为检查稀释水或接种稀释水的质量，以及检测人员的操作水平，将每升含葡萄糖和谷氨酸各150mg的标准液以1:50稀释比稀释后，与水样同步测定BOD5，测得值应在180-230mg/L之间，否则，应检查原因并予以纠正。
6、其他方法目前测定BOD值常采用BOD测定仪，可直接读取BOD值，操作简单，重现性好。1）检压库轮式BOD测定仪 在密闭系统中微生物分解有机物所损耗的氧气通过电解来补给，从电解所需电量来求得氧的消耗量，仪器自动显示测定结果。2）测压法 在密闭系统中微生物分解有机物消耗溶解氧引起气压变化，通过测定气压的变化得出BOD值。3）微生物法 用氧电极求得微生物分解有机物消耗的溶解氧量，仪器经标准BOD物质溶液校准后，可直接显示被测溶液的BOD值。