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如何去除生物制剂中的内毒素

时间:2024-10-12 08:04:57

1、样品处理:样品的 pH 值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。虽然结合内陕明溟艟毒素的 pH 范围在 鲂番黟谊6-9,但是 7-8 的 pH 范围是纯化的最佳范围。合适的离子浓度可以降低非特异性吸附,0.15-0.5M NaCl 的条件可以得到一个很好的去除效率和低的样品损失。所以,纯化之前可以使用处理过的氯化钠,0.1M 的氢氧化钠或 0.1M 盐酸来调节离子强度或 pH值。

2、活化树脂. 将预装柱置于铁架台,垂直固定,去除预装柱顶部的盖子,打开流速控制器,使保护液在重力作用下流干,瑕铆幌约加入 5ml 的再生缓冲液,调节流速控制器,保持流速在0.25ml/min(或者 10 滴/min),待再生缓冲液流干,再加入 5ml 再生缓冲液,再重复操作两次,确保体系保持无热原(即内毒素)存在。即使是第一次使用也必须进行这一步操作。这步操作大约需要 60 分钟完成。

3、平衡树脂. 活化完毕,加入 6ml 的平衡缓冲液,调节流速控制器,保持流速在 0.5ml/min,流干平衡缓冲液,再按此操作重复两次。这步操作大约需要 40 分钟完成。

4、内毒素去除. 将流速控制器关闭,使用无热源枪头将样品加入,打开控制器,控制流速不高于 0.25ml/min,流出液体积达到 1.5ml 后,使用无热源接收管接受样品,样品流干后,再加入 1.5ml-3.0ml 的平衡缓冲液淋洗,收集淋洗液。检测样品浓度及内毒素水平。

5、再次使用. 如果流出样品内毒素水平未能达到预期值,需要将预装柱重新再生,按照步骤1 重新再生,然后上样纯化。

6、保存条件. 如果预装柱用完后需要保存,先用 10ml 平衡缓冲液平衡柱子,待平衡液流干,加入 1.5ml 的再生缓冲 液(含 0.02%的叠氮化钠)。

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