动物体内转染之局部注射方法
1.局部注射的总注射剂量的确定
1、首先,必须确定局部注射的总注射量(最终注射量)。这个注射量可以根据文献,也可以通过实际操作来确定。实际操作过程中,一般采用多点注射,比如3点注射的方法。从不同方向进针,以药液覆盖全部靶组织为目标。
2.各组分剂量的确定
1、总注射剂量确定以后,比如通常直径25px的皮下肿瘤,其最大注射剂量为50ul左右,可根据体内转染试剂说明书(Entranster)确定各组分剂量。
2、如果条件允许,也可以少用或者不用葡萄糖疗义化匾溶液,以增加药液的量,达到更好的效果。但需要注意的是必须维持核酸和转染试剂的比例,RNA转染为:1ug(伊怕锱鳏RNA):0.5ul(RNA体内转染试剂);DNA转染为:1ug(DNA): 2ul(DNA体内转染试剂)。
3.核酸的稀释溶液
1、不论是质粒还是RNA粉末,建议用纯水稀释,并配制成1ug/ul浓度最好。如果由于某种原因,采用其它溶液稀释,可能会有部分沉淀产生。少量沉淀在动物体内不影响转染效果。
4.局部注射后的取样问题
1、由于愁抉痊歪局部注射容易造成药液分布不均,在注射的近端,药液浓度高,效果明细;远端,药液浓度低,效果低一些。所以,一方面,需要尽量将药液均匀覆盖全部靶组织,另一方面,后续实验取样时,在保证实验的情况下,尽量取注射区域附近的组织,不取或者少取药液覆盖差的组织,以增加实验效果。