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DNA 片段回收的方法

时间:2024-10-19 13:56:24

1、首先,用干净的刀片在紫外灯下切取含目的DNA片段的凝胶,尽量切除多余的凝胶,称取其重量。

DNA 片段回收的方法

2、然后,将凝胶放人离心管内,加人3 倍体积的溶胶液(BufferGM)。

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3、然后,将离心管在50%C 水浴中放置10min(直至胶完全熔解),其间不断温和地上下翻转离心管。如还有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液(Buffer GM)并适当地延长熔解时间。

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4、然后,将上一步所得的溶液加人一个吸附柱中(吸附柱放人收集管中),在12000r/min下离心30~60 s,倒掉收集管中的废液。

DNA 片段回收的方法

5、然后,加800PL 漂洗液(Buffer WB,使用前先加人96mL 的无水乙醇),静置3~5min,在12000r/min下离心30~60s,倒掉收集管中的废液。

DNA 片段回收的方法

6、然后,加500yL 漂洗液(Buffer WB),静置3~5min,在12000r/min下离心2min,倒掉收集管中的废液。

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7、最后,取出吸附柱,放入一个干净的离心管中,在吸附膜中间位置加人适量的洗脱缓冲液(Elution Buffer),室温放置2min。如回收量较多,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱由在2000r/min 离心2min的管底溶液即为所需DNA。将DNA 贮存于-20C 可长期保存。

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