1、贴壁细胞传代首先要在显微镜下观察细胞的密度,达到80%-90%就可以传代了。
2、不同的细胞传代方法不一定相同,像普通的哺乳动物细胞可以用常规方法消化,但有些细胞是不能用胰酶的,比如sf9昆虫细胞。
3、悬浮细胞的传代是不用消化的,直接离心。但传代比例需要根据细胞计数情况来确定。
4、胰酶消化时间和胰酶使用浓度要根据细胞类型来确定,难消化的细胞胰酶用0.25%加EDTA,像293细胞容易脱落的,就只能用0.05%的胰酶了。293细胞的消化还有很多技巧,后面会有一章详细说明。
5、消化的程度需要在显微镜观察,细胞呈单个排练。
6、使用玻璃吸管吹打细胞使其分散,但吹打细胞也很有技巧,有的细胞吹轻了,细胞不能完全分散,吹狠了,细弯挖峒擘胞死亡率高。不同细胞吹打技巧不一样。后续会介绍