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Western Blot中细胞/组织提取

时间:2024-10-13 08:01:49

1、准备工作:准备足够的冰、裂解液、BSA标准液等

2、裂解细胞/组织:将培养板取出,去除培养懋鲕壶迎基,用冷的1*PBS洗细胞一遍,弃1*PBS,并用枪头将培养板内的1*PBS吸干圄蔑蓖茏净。加入细胞裂解液,100ul/well。转移到1.5mlEP管中,放置冰上冰浴30min/将组织样品放置干冰中,从-80℃冰箱移出。把操作台上垫好干冰,用刀片切下组织少许,放到准备好的EP管中。用超声破碎仪进行组织破碎。此后将含破碎组织的裂解液转移到1.5mlEP管中,放置冰上冰浴30min。

3、离心,4℃,13000rpm、15min;

4、将上清液转移到新的1.5mlEP管中,放置冰上以待测蛋白浓度

5、利用购买的蛋白质测定试剂盒,配制BSA标准液及提取液,放入酶标仪中在相应的下进行检测

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